北京哪家医院看白癜风最好 https://jbk.39.net/yiyuanzaixian/bjzkbdfyy/xcxbdf_zx/p312yr1/原理-苯酚法测定可溶性糖-可溶性糖测定
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛(分子式见蒽酮法)能与苯酚缩合成-一种橙红色化合物,在10-mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在nm波长下有*大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定吸光度。苯酚法可用子甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,试剂便宜,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色可稳定min以上。
材料、仪器设备及试剂-苯酚法测定可溶性糖-可溶性糖测定
⑴材料
新鲜的植物叶片。
⑵仪器设备
分光光度计,水浴锅,刻度试管,刻度吸管。
⑶试剂
①90%苯酚溶液。称取90g苯酚(AR),加蒸馏水10mL溶解,在室温下可保存数月。
②9%苯酚溶液。取3mL90%笨酚溶液,加蒸馏水至30mL,现配现用。
③浓硫酸(比重1.84)。
④1%蔗糖标准液。将分析纯蔗糖在80C下烘至恒重,精确称取1.g,加少量水溶解,转人mL容量瓶中,加入0.5mI,浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。
⑤ug/L蔗撕标准液。精确吸取1%蔗糖标准液1mL加人ml容量瓶中,加水至刻度。
实验步骤-苯酚法测定可溶性糖-可溶性糖测定
(1)标准曲线
取20mL刻度试管11支,从0~10分别编号,按表1加入溶液和水。
然后按顺序向试管内加入1mL9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以5-20s加入5mL浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8mL,在室温下放暨30min,比色。然后以空白为参比,在nm波长下比色测定吸光度,以糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标推曲线方程。
(2)可溶性糖的提取
取新鲜植物叶片,擦净表面污物，剪碎混匀,称取0.10-0.30g,共3份(或干材料),分别放人3支刻度试管中,加入5-10mL蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25mL容量瓶中,反复漂洗试管及残渣,定容至刻度。
(3)测定
吸取0.5mL样品液于试管中(重复2次),加蒸馏水1.5mL,步骤与制作标准曲线相同,按顺序分别加人苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定吸光度。由标准曲线查出糖的含量。
结果计算
按下式计算测试样品的糖含量。
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