本文介绍了斐林试剂比色法测定还原糖的测定方法，包括还原糖测定的原理，实验所需试剂，实验步骤以及实验注意事项。
原理：-还原糖检测（斐林试剂比色法）-还原糖检测
植物组织中的可溶性糖可分为还原糖(主要是葡萄糖和果糖)和非还原糖(主要是蔗糖)两类。还原糖具有醛基和酮基.在碱性溶液中煮沸.能把斐林试剂中的Cu2+还原成Cu+,使蓝色的斐林试剂脱色,脱色的程度与溶液中含糖量成正比，在nm波长下比色测定吸光度.查标准曲线,即可计算出所测样品中还原糖的含量。
材料、仪器设备及试剂
(一)材料
新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。
(二)仪器设备
分光光度计,分析天平(感量1/),离心机,水浴锅,具塞刻度试管.刻度吸管,容量瓶.研钵。
(三)试剂
(1)斐林试剂A液:40gCuSO45H20溶解于蒸馏水定容至1L。
(2)斐林试剂B液:g酒石酸钾钠(KNaC4H4O65H20与gNaOH溶于蒸馏水中,并定容至1L。
A、B两液分别贮存,使用前等体积混合。
(3)0.1%葡萄糖标准液:取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.g.加蒸馏水溶解,定容至mL。
(4)0.1NNaOH。
(5)甲基红指示剂:0.1g甲基红溶于ml.60%乙醇中。
(6)10%Pb(Ac)2。
(7)饱和Na2SO4。
实验步骤-还原糖检测（斐林试剂比色法）-还原糖检测
1.标准曲线的制作
取7支试管,按表1分别加入各溶液。
将以上务管混合后加塞，于沸水浴中加热15min。取出后自来水冷却，0r/min离心15mnin。取上清液,用分光光度计在nn波长下比色,以蒸馏水作对照,读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度锴的各管的吸光度之差为横坐标,对应的糖含量为纵坐标,绘制标准曲线。
2.样品中还原糖的提取
取新鲜的植物样站洗净.擦干、剪碎,称取10.00g,放人研钵中研磨至糊状，用水洗人mL容量瓶中。当体积近ml,左右时,加2-3滴甲基红指示剂，如呈红色,可用0.1mol/L的NaOH中和至微黄色。若用风于样品，可称取干粉3.00g,先在烧杯中用少量水湿润,然后用水洗入mL容量瓶中,如显酸性.可用上法中和。
将容量瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min,其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品,此间可加10%PBb(Ac)2.除去蛋白质,至不再产生白色跟状沉淀时,加饱和Na2SO4除去多余的铅离子。30min后取出冷却,定容至刻度.摇勾后过滤待测。
3.样品测定
吸取6mL待测液,加4mL斐林试剂,其他操作与标准曲线相同，在nm波长下读取吸光度。以不含样品的空白臂的吸光度减去样品管的吸光度.在标.准曲线上查出糖含量。
结果计算-还原糖检测（斐林试剂比色法）-还原糖检测
按下式计算还原糖的百分含量。
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